六项呼吸道病原体（甲型流感/乙型流感/合胞病毒/腺病毒/肺炎支原体/鼻病毒）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

　　【摘要】

　　本试剂盒用于体外定性检测人咽拭子样本中的的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原体核酸，高灵敏度和特异性的核酸检测可一次检测多种病毒，全程检测时间约1小时，可实现对呼吸道感染病的早发现、早隔离、早报告和早治疗，及早为临床提供准确的诊疗和感染防控依据。

　　【检验原理】

　　六项呼吸道病原体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)采用Taqman荧光探针法，针对甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原体的高度保守且特异性区域，设计荧光检测的引物探针，采用不同的荧光基团进行标记，检测过程中的核酸经逆转录为cDNA，在扩增过程中，特异性引物和探针与靶序列结合，通过Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性实现PCR产物形成与荧光信号累积完全同步;通过检测不同荧光基团信号实现对样本中甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原体核酸的定性检测。

　　试剂盒含有内参设置，作为对试剂、核酸质量以及操作本身的质控，避免检测结果假阴性。

　　【检验方法】

　　1. 试剂准备

　　1.1. 取出试剂盒中反应buffer及引物探针Mix，室温放置，待完全融解后，振荡混匀，离心备用;取出试剂盒中的检测酶液，离心后备用。

　　1.2. 根据需准备样品数N(N=样本数+1管阳性质控品+1管阴性质控品)配制PCR-Mix，向荧光定量PCR八联反应管中分装每孔20μL PCR-Mix，用毕反应buffer、引物探针Mix和检测酶液立即放入-18℃以下冻存。

　　2. 样本处理

　　样本收到后先采用水浴锅56℃30min进行灭活。

　　提取采集的咽拭子样本，应保证RNA满足实验需要的RNA数量，提取的RNA样品立即检测或于-70℃以下保存(不超过7天);同时取相应体积的阳性质控品和阴性质控品进行提取。

　　3. 加样

　　在所设定好的每个反应管中分别依次加入步骤2中提取的阴性质控品提取RNA、阳性质控品提取RNA、待测样本RNA，各10µL，盖紧管盖，简短离心。

　　4.实时扩增(详见说明书)

　　4.1仪器通道及反应体积选择

　　4.2实时扩增条件设定

　　5.结果分析

　　【质量控制】