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人类FGFR3基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)
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人类FGFR3基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)

本产品用于定性检测膀胱癌患者福尔马林固定石蜡包埋样本RNA中人类FGFR3基因上的6个热点突变;运用荧光PCR技术,当天得到检测报告,满足临床及时诊治需求,辅助临床实现肿瘤的个体化治疗。
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  摘要

  本产品用于定性检测膀胱癌患者福尔马林固定石蜡包埋样本RNA中人类FGFR3基因上的6个热点突变;运用荧光PCR技术,当天得到检测报告,满足临床及时诊治需求,辅助临床实现肿瘤的个体化治疗。

  检测原理

  本试剂盒检测原理是基于扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)结合荧光定量PCR技术实现对石蜡包埋样本中提取的RNA进行定性检测。ARMS-PCR基本原理是,Taq DNA聚合酶缺少3′-5′外切酶活性,如果引物的3′端碱基与模板碱基不互补,则Taq DNA聚合酶无法延伸。本试剂盒根据已知突变设计特异的突变模板互补引物,使3′端碱基与突变模板碱基完全互补,与野生型模板不互补,同时在引物3′端的第2-5个碱基引入另外一个或者两个错配碱基,使之与野生型模板之间形成多个错配以阻止野生型模板的延伸,实现FGFR3突变基因的检测。

  本试剂盒中的2个融合位点的检测原理是在融合的两个基因的外显子上分别设计特异性引物和taqman探针,结合荧光定量PCR技术对石蜡包埋样本中提取的RNA进行定性检测。

  本试剂盒共采用了FAM、CY5和VIC三种荧光标记的探针,检测点突变的探针采用FAM荧光标记,融合位点的探针采用CY5荧光标记,内控采用VIC标记的荧光探针,内控试剂监控样本RNA提取质量和逆转录等过程。本试剂盒中同时含有UNG酶,可以选择性降解含有dU的PCR产物,有效降低因PCR产物污染导致的假阳性。每个样本共需要6个反应孔,每个反应孔只需要加入少量提取的样本RNA,通过内控的CT值来判断样本的质量,样本反应孔的CT值来判断样本的阴阳性。

  检验方法

  1. 提取膀胱癌患者福尔马林固定石蜡包埋样本RNA。

  2. 按照说明书准备逆转录反应。

  3. 在相应的八连管位置加入提取的RNA、阳性质控品和阴性质控品。

  4. 进行qPCR仪上机实验。

  5. 根据内控CT值和样本CT值判读结果。

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